menaka Saposhnikovia divaricata madio ho an'ny labozia sy savony fanaovana diffuser ambongadiny menaka tena ilaina vaovao ho an'ny diffuser fandoroana bararata
famaritana fohy:
2.1. Fanomanana ny SDE
Ny rhizomes SD dia novidina ho toy ny anana maina avy amin'ny Hanherb Co. (Guri, Korea). Nohamafisin'ny Dr. Go-Ya Choi ao amin'ny Institut Korea momba ny fitsaboana tatsinanana (KIOM) ireo akora zavamaniry. Ny santionany amin'ny voucher (laharan'ny 2014 SDE-6) dia napetraka tao amin'ny Herbarium Koreana an'ny loharanon-javamaniry mahazatra. Ny rhizomes maina amin'ny SD (320 g) dia nalaina indroa tamin'ny ethanol 70% (miaraka amin'ny reflux 2 h) ary avy eo dia nifantoka tamin'ny fanerena mihena ny fitrandrahana. Ny decoction dia voasivana, lyophilized ary tehirizina amin'ny 4 ° C. 48,13% (w/w) ny vokatra azo avy amin'ny akora fanombohana maina.
Ny famakafakana kromatografika dia natao tamin'ny rafitra HPLC (Waters Co., Milford, MA, Etazonia) sy ny mpitsikilo array photodiode. Ho an'ny famakafakana HPLC ny SDE, ny prim-O-glucosylcimifugin fenitra dia novidina tao amin'ny Korea Promotion Institute for Traditional Medicine Industry (Gyeongsan, Korea), arysec-O-glucosylhamaudol sy 4′-O-β-D-glucosyl-5-O-methylvisamminol dia natokana tao amin'ny laboratoara ary fantarina tamin'ny famakafakana spectral, indrindra amin'ny NMR sy MS.
Ny santionany SDE (0.1 mg) dia levona amin'ny ethanol 70% (10 mL). Ny fisarahana kromatografika dia natao tamin'ny tsanganana XSelect HSS T3 C18 (4.6 × 250 mm, 5).μm, Waters Co., Milford, MA, Etazonia). Ny dingana finday dia ahitana acetonitrile (A) sy 0.1% acetic asidra ao anaty rano (B) amin'ny hafainganam-pandehan'ny 1.0 mL / min. Nampiasa programa gradient multistep toy izao manaraka izao: 5% A (0 min), 5–20% A (0–10 min), 20% A (10–23 min), ary 20–65% A (23–40 min). ). Ny halavan'ny onjam-pandrenesana dia nojerena tamin'ny 210-400 nm ary voarakitra ao amin'ny 254 nm. Ny habetsahan'ny tsindrona dia 10.0μL. Vahaolana mahazatra ho an'ny famaritana ny krômôna telo dia nomanina tamin'ny fifantohana farany 7.781 mg/mL (prim-O-glucosylcimifugin), 31,125 mg/mL (4′-O-β-D-glucosyl-5-O-methylvisamminol), ary 31,125 mg/mL (sec-O-glucosylhamaudol) ao anaty methanol ary tazomina amin'ny 4°C.
2.3. Fanombanana ny hetsika manohitra ny inflammatoireIn Vitro
2.3.1. Kolontsaina sela sy fitsaboana santionany
Ny sela RAW 264.7 dia azo avy amin'ny American Type Culture Collection (ATCC, Manassas, VA, USA) ary nitombo tao amin'ny medium DMEM misy antibiotika 1% ary 5.5% FBS. Ny sela dia natsofoka tao amin'ny atmosfera hamandoana 5% CO2 amin'ny 37 ° C. Mba hamporisihana ny sela, dia nosoloina ny medium DMEM vaovao, ary ny lipopolysaccharide (LPS, Sigma-Aldrich Chemical Co., St. Louis, MO, Etazonia) amin'ny 1.μg / mL dia nampiana na misy na tsy misy SDE (200 na 400μg/mL) mandritra ny 24 ora fanampiny.
2.3.2. Famaritana ny oksida nitric (NO), Prostaglandin E2 (PGE2), Factor Necrosis Tumor-α(TNF-α), ary Interleukin-6 (IL-6) Production
Ny sela dia notsaboina tamin'ny SDE ary namporisika tamin'ny LPS nandritra ny 24 ora. Ny famokarana TSY dia nodinihina tamin'ny fandrefesana nitrite tamin'ny fampiasana ny reagent Griess araka ny fanadihadiana teo aloha [12]. Ny tsiambaratelon'ny cytokine inflammatoire PGE2, TNF-α, ary ny IL-6 dia nofaritana tamin'ny fampiasana kitapo ELISA (rafitra R&D) araka ny torolalan'ny mpanamboatra. Ny fiantraikan'ny SDE amin'ny NO sy ny famokarana cytokine dia voafaritra amin'ny 540 nm na 450 nm amin'ny fampiasana Wallac EnVision™mpamaky microplate (PerkinElmer).
2.4. Fanombanana ny hetsika AntiosteoarthritisAo amin'ny Vivo
2.4.1. BIBY
Ny voalavo lahy Sprague-Dawley (7 herinandro) dia novidina tao amin'ny Samtako Inc. (Osan, Korea) ary napetraka ao anatin'ny fepetra voafehy miaraka amin'ny tsingerin'ny hazavana / maizina 12 ora ao amin'ny°C ary% hamandoana. Nomena sakafo laboratoara sy rano ny voalavoad libitum. Ny fomba fanandramana rehetra dia natao mifanaraka amin'ny torolàlana National Institutes of Health (NIH) ary nankatoavin'ny Komitin'ny Fikarakarana sy Fampiasana Biby ao amin'ny oniversite Daejeon (Daejeon, repoblikan'i Korea).
2.4.2. Fampidirana ny OA miaraka amin'ny MIA amin'ny voalavo
Ny biby dia natao kisendrasendra ary nomena vondrona fitsaboana alohan'ny hanombohan'ny fianarana (isaky ny vondrona). MIA solution (3 mg/50μL amin'ny 0.9% saline) dia natsindrona mivantana tao amin'ny habaka intra-articular amin'ny lohalika havanana eo ambanin'ny fanatoranana nateraky ny fifangaroan'ny ketamine sy xylazine. Nozaraina ho vondrona efatra ny voalavo: (1) ny vondrona saline tsy misy tsindrona MIA, (2) ny vondrona MIA misy ny tsindrona MIA, (3) ny vondrona voatsabo SDE (200 mg / kg) miaraka amin'ny tsindrona MIA, ary (4) ) ny vondrona tsaboina indomethacin- (IM-) (2 mg/kg) miaraka amin'ny tsindrona MIA. Ny voalavo dia nomena am-bava miaraka amin'ny SDE sy IM 1 herinandro alohan'ny fampidirana MIA mandritra ny herinandro 4. Ny fatran'ny SDE sy IM ampiasaina amin'ity fandalinana ity dia mifototra amin'ireo izay nampiasaina tamin'ny fianarana teo aloha [10,13,14].
2.4.3. Fandrefesana ny fitsinjarana vesatra amin'ny Hindpaw
Taorian'ny fampidirana OA, dia tapaka ny fifandanjana tany am-boalohany amin'ny fahaiza-mitondra lanja ny hindpaws. Ny tester incapacitance (Linton instrumentation, Norfolk, UK) dia nampiasaina hanombanana ny fiovan'ny fandeferana mavesatra. Napetraka tsara tao amin’ny efitra fandrefesana ny voalavo. Ny hery enti-mitondra lanja ataon'ny rantsam-batany dia salanisa nandritra ny 3 segondra. Ny tahan'ny fizarana lanja dia nokajiana tamin'ny alalan'ny fampitoviana manaraka: [lanja eo amin'ny rantsambatana havanana/(lanja eo amin'ny rantsana aoriana havanana + lanja eo amin'ny rantsana aoriana havia)] × 100 [15].
2.4.4. Fandrefesana ny haavon'ny cytokine serum
Ny santionan'ny ra dia natao centrifuge tamin'ny 1,500 g nandritra ny 10 minitra tamin'ny 4 ° C; avy eo dia nangonina ny serum ary tehirizina ao amin'ny -70 ° C mandra-pampiasaina. Ireo singa mifandraika amin'ny IL-1β, IL-6, TNF-α, ary PGE2 ao amin'ny serum dia norefesina tamin'ny fampiasana kitapo ELISA avy amin'ny R&D Systems (Minneapolis, MN, Etazonia) araka ny torolalan'ny mpanamboatra.
2.4.5. Real-Time Quantitative RT-PCR Analysis
Ny totalin'ny RNA dia nalaina avy amin'ny tadin'ny lohalika tamin'ny fampiasana ny TRI reagent® (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, Etazonia), navadika ho cDNA sy PCR-amplified mampiasa kitapo TM One Step RT PCR miaraka amin'ny SYBR green (Applied Biosystems). , Grand Island, NY, USA). Ny PCR ara-potoana tena izy dia natao tamin'ny alàlan'ny rafitra Applied Biosystems 7500 Real-Time PCR (Applied Biosystems, Grand Island, NY, Etazonia). Ny filaharana voalohany sy ny filaharan'ny probe dia aseho amin'ny tabilao1. Ny santionany amin'ny cDNAs santionany sy ny GAPDH cDNA mitovy dia nohamafisina tamin'ny TaqMan® Universal PCR mix master misy ADN polymerase araka ny torolalan'ny mpanamboatra (Applied Biosystems, Foster, CA, USA). Ny fepetra PCR dia 2 min amin'ny 50 ° C, 10 min amin'ny 94 ° C, 15 s amin'ny 95 ° C, ary 1 min amin'ny 60 ° C mandritra ny 40 cycles. Ny fifantohan'ny fototarazo kendrena dia nofaritana tamin'ny alalan'ny Ct fampitahana (laharan'ny tsingerin'ny tokonam-baravarana eo amin'ny teboka eo anelanelan'ny tetika fanamafisam-peo sy ny tokonam-baravarana), araka ny torolalan'ny mpanamboatra.
Osteoarthritis (OA) no aretin'ny musculoskeletal matetika indrindra ary aretin'ny tonon-taolana mahazatra indrindra amin'ny zokiolona.1]. Ny OA dia toe-javatra iray vokatry ny ratra, fahaverezan'ny rafitra sy ny fiasan'ny cartilage, ary ny dysregulation ny lalan'ny proinflammatoire sy anti-inflammatoire [2,3]. Izy io dia misy fiantraikany voalohany amin'ny cartilage articular sy taolana subchondral amin'ny tonon-taolana synovial ary miteraka tsy fahombiazan'ny fiaraha-miasa, miteraka fanaintainana rehefa mitondra lanja, anisan'izany ny mandeha sy mitsangana [4].
Tsy misy fanafody ho an'ny OA, satria sarotra be ny mamerina ny cartilage rehefa rava [5]. Ny tanjon'ny fitsaboana dia ny hanamaivanana ny fanaintainana, hihazona na hanatsara ny fivezivezena iombonana, hampitombo ny tanjaky ny tonon-taolana, ary hampihena ny voka-dratsin'ny aretina. Ny fitsaboana amin'ny pharmacologique amin'ny OA dia mikendry ny hampihenana ny fanaintainana mba hampitombo ny fiasan'ny mpiara-miasa sy ny kalitaon'ny fiainana. Na dia ny faharavan'ny cartilage aza no zava-niseho lehibe ao amin'ny OA, ny fahapotehan'ny collagène no tranga fototra izay mamaritra ny fivoaran'ny OA tsy azo ovaina miaraka amin'ny areti-maso [6,7]. Ny fitsaboana amin'ny hetsika manohitra ny inflammatoire sy ny chondroprotective dia andrasana hanamaivana ny fanaintainana ary hitazona ny fahamendrehan'ny matrix amin'ny marary OA.
Noho izany, ny fampihenana ny areti-maso dia mety hahasoa amin'ny fitantanana OA. Ny fikarohana vao haingana dia manolotra anjara asa fiarovana ho an'ny loharanon-javamaniry amin'ny fivoaran'ny OA, amin'ny fanalefahana ny areti-maso chondrocyte sy ny faharavan'ny cartilage bebe kokoa, amin'ny alàlan'ny fahafahan'izy ireo mifandray amin'ny tavy mifandray, izay miteraka fanalefahana ny fanaintainan'ny tonon-taolana.8].
Ny fototry nySaposhnikovia divaricataNy Schischkin (Umbelliferae) dia ampiasaina betsaka amin'ny fitsaboana nentim-paharazana amin'ny fitsaboana aretin'andoha, fanaintainana, areti-maso ary arthritis any Korea sy Shina [9,10]. Ny vokatry ny pharmacological isan-karazany amin'nySaposhnikovia divaricata(SD) dia misy ihany koa ny fananana anti-inflammatoire, analgesic, antipyretic ary antiarthritic [9,11]. Ny fanadihadiana vao haingana dia naneho fa ny SD chromone extract dia manana fiantraikany amin'ny arthritis antirheumatoid amin'ny modely totozy amin'ny arthritis vokatry ny collagen [10]; Na izany aza, vitsy ny fanadihadiana natao mba hanohanana ny hetsika manohitra ny areti-mifindra sy antiarthritisSaposhnikovia divaricatafitrandrahana (SDE).
Noho izany, ny fanadihadiana amin'izao fotoana izao dia nanadihady ny hetsika manohitra ny inflammatoire sy antiosteoarthritis amin'ny fitrandrahana ethanol 70% an'ny SD. Voalohany, nodinihina ny fiantraikany manohitra ny inflammatoire an'ny SDEin vitroamin'ny sela RAW 264.7 LPS. Avy eo, ny fiantraikan'ny antiosteoarthritis an'ny SDE dia norefesina tamin'ny fanombanana ny fizarana lanja, ny fanimbana ny cartilage articular, ary ny valin'ny areti-mifindra amin'ny modely voalavo amin'ny monosodium iodoacetate- (MIA-) induced OA.